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ezsep™ c18固相萃取柱用于水产品中氯霉素的检测-乐鱼入口

更新时间:2024-06-25       点击次数:129

前言:

        氯霉素类抗生素可作用于细菌核糖核蛋白体的50s亚基,而阻挠蛋白质的合成,属抑菌性广谱抗生素,能够用于人体某些疾病的治疗,以及作为兽药用于防范及治疗动物疾病。在日常生活中氯霉素等激素类药物会广泛应用于养殖业,例如鱼、虾等水产类食品,养殖户为了所养殖的鱼、虾能够快速生长,并且不生病,会放很多抗生素类药物到养殖的水中,从而造成药物在动物体内及动物体表富集,而人类食用这些肉类会使兽药残留进入人体,从而影响身体健康。

本文参照《gb 31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》,利用ezseptmc18固相萃取柱(1000 mg/6ml货号:pz10304进行净化,再用高效液相色谱串联质谱检测进行检测,建立了一种对水产品中氯霉素的分析方法。

 

关键词:

水产品,氯霉素,固相萃取,

1,  实验过程

1.1     仪器与试剂   

spe1000 全自动固相萃取系统北京莱伯泰科仪器股份有限公司

m64高通量平行浓缩仪北京莱伯泰科仪器股份有限公司

4500质谱系统,sciex公司

ezseptmc18固相萃取柱(1000 mg/6ml货号:pz10304北京莱伯帕兹检测科技有限公司

冷冻离心机,gl-20g-,上海安亭科学仪器厂  ;  

甲醇(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;

乙腈(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;

正己烷(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;

乙酸乙酯(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;

氯化钠(分析纯),购自国药集团化学试剂有限公司

1.2                      工作液配制

氯霉素标准储备液:100μg/ml,溶剂为甲醇,购自坛墨质检标准物质中心 。

氯霉素-d5标准储备液:100μg/ml,溶剂为甲醇,购自坛墨质检标准物质中心 。

标准中间液:移取氯霉素储备液和氯霉素-d5标准储备液各0.1ml,分别用甲醇稀释至10ml容量瓶中,配制成浓度为1.0μg/ml的氯霉素标准中间液氯霉素-d5同位素标准中间液。

标准使用液:移取氯霉素中间液和氯霉素-d5标准中间液各1ml,分别用甲醇稀释至10ml容量瓶中,配制成浓度为0.1μg/ml的氯霉素标准使用液及氯霉素-d5同位素标准使用液。

分别移取0.1μg/ml的氯霉素标准使用液0、0.01、0.05、0.10、0.20、0.50ml分别置于10ml容量瓶中并加入氯霉素-d5同位素标准使用液0.2 ml以纯水定容至刻度,标准浓度为0 μg/l、0.1 μg/l、0.5 μg/l、1 μg/l、2μg/l、5μg/l, 氯霉素-d5浓度固定为2μg/l。

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

 取鱼肉5g,加氯霉素-d5同位素标准使用液0.2 ml、乙腈5ml、4%氯化钠溶液5ml,涡旋振荡2min,4000r/min离心10min,取上清液,残渣重复提取1次,合并上清液。加正己烷5ml,涡旋振荡1min,2000r/min离心10min,弃去上层液,正己重复处理1次。加水饱和的乙酸乙酯溶液5ml,涡旋振荡1min,2000r/min离心10min,上层液转移到20ml上样瓶中,重复提取1次,合并提取液,氮气吹干,加3ml5%乙腈水溶液溶解,混匀,备用待净化。

1.3.2 固相萃取净化 

ezseptmc18固相萃取柱(1000 mg/6ml货号:pz1030410ml甲醇、10ml水依次进行活化,取1.3.1待净化液上样,上样结束后用3ml、3ml水淋洗萃取柱,再用4ml 50%甲醇水溶液洗脱萃取柱,收集洗脱液,加水饱和乙酸乙酯4ml,涡旋振荡1min,2000r/min离心5min,取上层液,重复处理1次,合并上层溶液,氮气吹至近干干。加1ml 50%甲醇水溶液溶解,混匀过微孔滤膜后供lc-ms/ms测定。

1.3.3 lc-ms/ms仪器条件

色谱柱:shim-pack velox c18(2.7μm,2.1*100mm);

检测方式:多反应监测(mrm);

流动相:a:水-b: 甲醇(50:50);

流速:0.2ml/min;

进样量:1μl;

2,                      实验结果

 

图1 标液色谱图

 

图2氯霉素标准曲线图

3,                      结论 

本次实验展示了使用ezseptmc18固相萃取柱(1000 mg/6ml货号:pz10304对水产品中氯霉素进行净化,通过高效液相色谱串联质谱进行测定,其加标回收率在84.7%~105.2%之间,rsd在8.1%,能够满足标准要求。说明ezseptmc18固相萃取柱(1000 mg/6ml货号:pz10304能很好的完成方法中的净化工作,并且结果稳定、可靠。

4,                      参考文献

1.       《gb 31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》

 

 

 

 1   加标回收率结果

回收率(%

均值

rsd

1

2

3

4

5

6

%

%


1.0

86.3

84.7

101.3

100.9

93.5

105.2

95.3

8.1


 


 


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